Identification de cibles protéiques dans les cellules endothéliales cérébrales pour les thérapies moléculaires des malformations artério-veineuses cérébrales (MAV)

CONTEXTE :
Pour développer un nouveau traitement moléculaire ciblé pour le cerveau (AVM), l'identification des protéines membranaires localisées sur l'endothélium AVM est cruciale. Les méthodes de traitement actuelles sont la chirurgie et la radiochirurgie. Cependant, une occlusion complète après radiochirurgie est obtenue dans les 3 ans, tandis que le patient reste à risque d'hémorragie. Cette étude vise à identifier les cibles protéiques potentielles dans les cellules endothéliales AVM qui discriminent ces vaisseaux des vaisseaux normaux ; ces protéines cibles seront étudiées pour la thérapie moléculaire des MAV cérébrales afin de favoriser une thrombose rapide après radiochirurgie.
METHODES:
Nous avons utilisé la biotinylation in vitro que nous avons développée et la spectrométrie de masse pour détecter les protéines exposées à la surface cellulaire dans des cultures de cellules endothéliales cérébrales murines (bEnd.3). Deux formes de spectrométrie de masse ont été appliquées (iTRAQ-MS et MSE) pour identifier et quantifier l'expression des protéines membranaires à différents moments après l'irradiation qui simule une approche de traitement radiochirurgical. L'immunocytochimie a été utilisée pour confirmer l'expression de protéines membranaires sélectionnées. Le logiciel ProteinPilot V4.0 a été utilisé pour analyser les données iTRAQ-MS et les données MSE ont été analysées à l'aide du logiciel ProteinLynx Global Server version 2.5.
RÉSULTATS:
Les données protéomiques ont révélé plusieurs protéines membranaires exprimées de manière différentielle entre les cellules irradiées et non irradiées à des moments précis, par exemple PECAM-1, cadhérine-5, PDI, EPCR et intégrines. Les données d'immunocytochimie ont confirmé l'expression de ces protéines.
CONCLUSION:
La biotinylation des protéines de surface cellulaire et l'analyse protéomique ont identifié avec succès les protéines membranaires des cellules endothéliales cérébrales murines en réponse à l'irradiation. Ce travail suggère des molécules protéiques cibles potentielles pour l'évaluation dans des modèles animaux de cerveau-AVM.

Simonian M, Loo RRO, Rannulu N, Loo JA, Molloy MP, Stoodley MA.

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