HINTERGRUND:
Um eine neue molekulare gezielte Behandlung des Gehirns (AVMs) zu entwickeln, ist die Identifizierung von Membranproteinen, die auf dem AVM-Endothel lokalisiert sind, von entscheidender Bedeutung. Aktuelle Behandlungsmethoden sind Chirurgie und Radiochirurgie. Eine vollständige Okklusion nach der Radiochirurgie wird jedoch innerhalb von 3 Jahren erreicht, während für den Patienten weiterhin das Risiko einer Blutung besteht. Diese Studie zielt darauf ab, potenzielle Proteinziele in AVM-Endothelzellen zu identifizieren, die diese Gefäße von normalen Gefäßen unterscheiden; Diese Proteinziele werden für die molekulare Therapie von Gehirn-AVMs untersucht, um eine schnelle Thrombose nach Radiochirurgie zu fördern.
METHODEN:
Wir verwendeten die von uns entwickelte In-vitro-Biotinylierung und Massenspektrometrie, um zelloberflächenexponierte Proteine in Kulturen muriner Gehirnendothelzellen nachzuweisen (bEnd.3). Zwei Formen der Massenspektrometrie wurden angewendet (iTRAQ-MS und MSE), um die Membranproteinexpression zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Bestrahlung zu identifizieren und zu quantifizieren, was einen radiochirurgischen Behandlungsansatz simuliert. Mithilfe der Immunzytochemie wurde die Expression ausgewählter Membranproteine bestätigt. Zur Analyse der iTRAQ-MS-Daten wurde die Software ProteinPilot V4.0 verwendet, und die MSE-Daten wurden mit der Software ProteinLynx Global Server Version 2.5 analysiert.
ERGEBNISSE:
Die Proteomikdaten zeigten mehrere unterschiedlich exprimierte Membranproteine zwischen bestrahlten und nicht bestrahlten Zellen zu bestimmten Zeitpunkten, z. B. PECAM-1, Cadherin-5, PDI, EPCR und Integrine. Immunzytochemische Daten bestätigten die Expression dieser Proteine.
FAZIT:
Durch die Biotinylierung von Zelloberflächenproteinen und die Proteomikanalyse konnten Membranproteine aus Endothelzellen des Mausgehirns als Reaktion auf Bestrahlung erfolgreich identifiziert werden. Diese Arbeit schlägt potenzielle Zielproteinmoleküle für die Bewertung in Tiermodellen der Gehirn-AVM vor.
Simonian M., Loo RRO, Rannulu N., Loo JA, Molloy MP, Stoodley MA.
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